生物检定统计法 中国药典2020版三部三部通则1431
生物检定统计法中国药典2020版三部三部通则1431 一、总则 生物检定法是利用生物体包括整体动物、离体组织、器官、细胞和微生物等评估药物生物活性的一种方法。它以药物的药理作用为基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计在一定条件下比较供试品和与其相当的标准品或对照品所产生的特定反应，通过等反应剂量间比例的运算或限值剂量引起的生物反应程度，从而测定供试品的效价、生物活性或杂质引起的毒性。 生物检定统计法主要叙述应用生物检定时必须注意的基本原则、一般要求、实验设计及统计方法。有关品种用生物检定的具体实验条件和要求，必须按照该品种生物检定法项下的规定。 生物检定标准品凡中国药典规定用生物检定的品种都有其生物检定标准品（S）。S都有标示效价，以效价单位（u）表示，其含义和相应国际标准品的效价单位一致。 供试品供试品（T）或（U）是供检定其效价的样品，它的活性组分应与标准品基本相同。AT或AU是T或U的标示量或估计效价。 等反应剂量对比 生物检定是将T和其S在相同的实验条件下同时对生物体或其离体器官组织等的作用进行比较，通过对比，计算岀它们的等反应剂量比值（R），以测得T的效价PT。 R是S和T等反应剂量（dS、dT）的比值，即R= dS / dT 。 M是S和T的对数等反应剂量（xS、xT）之差，即M=lg dS -lg dT = xS-xT。R=antilgM。 PT是通过检定测得T的效价含量，称T的测得效价，是将效价比值（R）用T的标示量或估计效价AT校正之后而得，即PT=AT·R或PT=AT•antilgM。 检定时，S按标示效价计算剂量，T按标示量或估计效价（AT）计算剂量，注意调节T的剂量或调整其标示量或估计效价，使S和T的相应剂量组所致的反应程度相近。 生物变异的控制 生物检定具有一定的实验误差，其主要来源是生物变异性。因此生物检定必须注意控制生物变异，或减少生物变异本身，或用适宜的实验设计来减小生物变异对实验结果的影响，以减小实验误差。控制生物变异必须注意以下几点： （1）生物来源、饲养或培养条件必须均一。 （2） 对影响实验误差的条件和因子，在实验设计时应尽可能作为因级限制，将选取的因级随机分配至各组。例如体重、性别、窝别、双碟和给药次序等都是因子，不同体重是体重因子的级，雌性、雄性是性别因子的级，不同窝的动物是窝别因子的级，不同双碟是碟间因子的级，给药先后是次序因子的级等。按程度划分的级（如动物体重），在选级时，应选动物较多的邻近几级，不要间隔铋越选级。 （3） 按实验设计类型的要求将限制的因级分组时，也必须严格遵守随机的原则。 误差项 指从实验结果的总变异中分去不同剂量及不同因级对变异的影响后，剩余的变异成分，用方差（s2）表示。对于因实验设计类型的限制无法分离的变异成分，或估计某种因级对变异的影响小，可不予分离者，都并入s2。但剂间变异必须分离。 误差项的大小影响标准误SM和可信限❶（FL）。 不同的检定方法和实验设计类型，分别按有关的公式计算s2。 可靠性测验要求在实验所用的剂量范围内，剂量或对数剂量的反应（或反应的函数）符合特定模型要求，且标准品与供试品的线性满足计算原理的要求，即满足系统适用性和样品适用性要求，方可按有关公式计算供试品的效价和可信限。如： 平行（直）线模型要求其在所用剂量范围内，对数剂量与反应（或反应的函数）呈直线关系，供试品和标准品的直线满足平行性要求； 四参数模型要求其在所用剂量范围内，对数剂量与反应（或反应的函数）呈S曲线形关系，供试品和标准品的S形曲线平行； 质反应资料要求其在所用剂量范围内，对数剂量与反应（或反应的函数）呈广义线性关系，供试品和标准品呈线性平行。 可信限和可信限率可信限（FL）标志检定结果的精密度。M的可信限是M的标准误SM和t值的乘积。（t・SM），用95%的概率水平。M+ t·SM是可信限的高限；是可信限的低限。用其反对数计算得R和FT的可信限低限及高限，是在95%的概率水平下从样品的检定结果估计其真实结果的所在范围。 R或PT的可信限率（FL%）是用R或PT的可信限计算而得，为可信限的高限与低限之差除以2倍效价均值后的百分率。 计算可信限的t值是根据s2的自由度（f）查t值表而得。t值与f的关系见表一。 表一 自由度（f）及对应的双侧t值（P=0.95） f t f t 3 3.18 14 2.15 4 2.78 16 2.12 5 2.57 18 2.10 6 2.45 20 2.09 7 2.37 25 2.06 8 2.31 30 2.04 9 2.26 40 2.02 10 2.23 60 2.00 11 2.20 120 1.98 12 2.18 00 1.96 各品种的检定方法项下都有其可信限率的规定，如果检定结果不符合规定，可缩小动物体重范围或年龄范围等生物样本间的差异，或调整对供试品的估计效价或调节剂量，重复实验以减小可信限率。 对同批供试品重复试验所得“次实验结果（包括FL%超过规定的结果），可按实验结果的合并计算法算得PT的均值及其FL%作为检定结果。 后续内容，详见附件生物检定统计法 中国药典2020版三部三部通则1431 sy.pdf
