A群脑膜炎球菌多糖疫苗 执行标准 中国药典2020版三部预防类

A群脑膜炎球菌多糖疫苗 执行标准 中国药典2020版三部预防类

A群脑膜炎球菌多糖疫苗
A Qun Naomoyanqiujun Duotang Yimiao
Group A Meningococcal Polysaccharide Vaccine
　　本品系用A群脑膜炎奈瑟球菌培养液，经提取获得的荚膜多糖抗原，纯化后加入适宜稳定剂后冻干制成。用于预防A群脑膜炎奈瑟球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。
　　1  基本要求
　　生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
　　2  制造
　　2.1  菌种
　　生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”的有关规定。
　　2.1.1  名称及来源
　　生产用菌种为A群脑膜炎奈瑟球菌CMCC 29201（A4）菌株。
　　2.1.2  种子批的建立
　　应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理及质量控制”的有关规定。
　　2.1.3  种子批的传代
　　主种子批启开后至工作种子批，传代应不超过5代；工作种子批启开后至接种发酵罐培养，传代应不超过5代。
　　2.1.4  种子批的检定
　　2.1.4.1  培养特性
　　菌种接种于适宜培养基，A群脑膜炎奈瑟球菌在25℃不生长。于35～37℃二氧化碳环境中培养16～20小时，长出光滑、湿润、灰白色的菌落，菌苔易取下，在0.85%～0.90%氯化钠溶液中呈现均匀混悬液。
　　2.1.4.2  染色镜检
　　应为革兰氏阴性双球菌、单球菌。
　　2.1.4.3  生化反应
　　发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸、不产气；不发酵乳糖、甘露醇、果糖及蔗糖（通则3605）。
　　2.1.4.4  血清学试验
　　取经35～37℃培养16～20小时的菌苔；混悬于含0.5%甲醛的0.85%～0.90%氯化钠溶液中，或56℃加热30分钟杀菌以后，使每1ml含菌1.0×109～2.0×109；与同群参考血清做定量凝集反应，置35～37℃过夜，次日再置室温2小时观察结果。以肉眼可见清晰凝集现象（+）之血清最高稀释度为凝集效价，必须达到血清原效价之半。
　　2.1.5  种子批的保存
　　种子批应冻干保存于8℃及以下。
　　2.2  原液
　　2.2.1  生产用种子
　　启开工作种子批菌种，经适当传代、检定培养特性及染色镜检合格后接种于培养基上，制备数量适宜的生产用种子。
　　2.2.2  生产用培养基
　　采用改良半综合培养基或经批准的其他适宜培养基。培养基不应含有与十六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成分。含羊血的培养基仅用于菌种复苏。
　　2.2.3  培养
　　采用培养罐液体培养。在培养过程中取样进行纯菌检查，涂片做革兰氏染色镜检，如发现污染杂菌，应废弃。
　　2.2.4  收获及杀菌
　　于对数生长期的后期或静止期的前期收获，取样进行菌液浓度测定及纯菌检查，合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌。杀菌条件以确保杀菌完全又不损伤其多糖抗原为宜。
　　2.2.5   纯化
　　2.2.5.1  去核酸
　　将已杀菌的培养液离心后收集上清液，加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀，形成沉淀；将已杀菌的培养物，离心去菌体后收集上清液，采用十六烷基三甲基溴化铵沉淀法提取复合多糖。
　　2.2.5.2  沉淀多糖
　　取2.2.5.1的上清液，加入乙醇溶液沉淀多糖，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮洗涤，沉淀物即为粗制多糖。应保存在－20℃以下，待纯化。
　　2.2.5.3  多糖纯化
　　将粗制多糖溶解于醋酸钠溶液中，用冷苯酚提取，离心收集上清液，并用适宜溶液透析或超滤；加入乙醇沉淀，沉淀物用无水乙醇及丙酮分别洗涤，用灭菌注射用水溶解，除菌过滤后即为多糖原液。提取过程应尽量在15℃以下进行。
　　2.2.6  原液检定
　　按3.1项进行。
　　2.2.7   保存及有效期
　　于－20℃以下保存。自收获杀菌之日起，疫苗总有效期应不超过60个月。
　　2.3   半成品
　　2.3.1   配制
　　用适宜稀释剂稀释原液。每1次人用剂量含多糖30μg，可加适量乳糖等。
　　2.3.2  半成品检定
　　按3.2项进行。
　　2.4   成品
　　2.4.1  分批
　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。
　　2.4.2   分装及冻干
　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。冻干过程中制品温度应不高于30℃，真空或充氮封口。
　　2.4.3   规格
　　按标示量复溶后每瓶5ml（10次人用剂量），含多糖300μg；按标示量复溶后每瓶2.5ml（5次人用剂量），含多糖150μg。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg。
　　2.4.4   包装
　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定。
　　3  检定
　　3.1  原液检定
　　3.1.1  鉴别试验
　　采用免疫双扩散法（通则3403），本品与A群脑膜炎奈瑟球菌抗体应形成明显沉淀线。
　　3.1.2  化学检定
　　3.1.2.1  固体总量
　　依法测定（通则3101）。A群多糖于50℃干燥至恒重。
　　3.1.2.2   蛋白质含量
　　应小于10mg/g（通则0731第二法）。
　　3.1.2.3  核酸含量
　　应小于10mg/g，核酸在波长260nm处的吸收系数（（） ）为200（通则0401）。
　　3.1.2.4  Ｏ-乙酰基含量
　　应不低于2mmol/g（通则3117）。
　　3.1.2.5  磷含量
　　应不低于80mg/g（通则3103）。
　　3.1.2.6  多糖分子大小分布测定
　　多糖分子的KD值应不高于0.40，KD值小于0.5的洗脱液多糖回收率应大于76%（通则3419）。
　　3.1.2.7  苯酚残留量
　　每克固体总量中苯酚应不高于6.0mg（通则3113）。
　　3.1.3  无菌检查
　　依法检查（通则1101），应符合规定。
　　3.1.4   细菌内毒素检查
　　依法检查（通则1143），应不高于25EU/μg；也可采用热原检查法（通则1142）检查，注射剂量按家兔体重每1kg注射0.05μg多糖，应符合规定。
　　3.2  半成品检定
　　无菌检查
　　依法检查（通则1101），应符合规定。
　　3.3  成品检定
　　除装量差异检查、水分测定、多糖含量测定、多糖分子大小分布测定和异常毒性检查外，按制品标示量加入灭菌PBS复溶后进行其余各项检定。
　　3.3.1  鉴别试验
　　按3.1.1项进行。
　　3.3.2  物理检查
　　3.3.2.1  外观
　　应为白色疏松体，按标示量加入PBS应迅速复溶为澄明液体，无异物。
　　3.3.2.2  装量差异
　　依法检查（通则0102），应符合规定。
　　3.3.2.3  渗透压摩尔浓度
　　依法测定（通则0632），应符合批准的要求。
　　3.3.3  化学检定
　　3.3.3.1  水分
　　应不高于3.0%（通则0832）。
　　3.3.3.2  多糖含量
　　每1次人用剂量多糖含量应不低于30μg。根据以下比例（多糖含量∶磷含量为1000∶75），先测定磷含量应不低于2.25μg（通则3103），再计算出多糖含量。
　　3.3.3.3  多糖分子大小分布测定
　　每5批疫苗至少抽1批检查多糖分子大小。KD值应不高于0.40，KD值小于0.5的洗脱液多糖回收率应大于76%（通则3419）。
　　3.3.4  无菌检查
　　依法检查（通则1101），应符合规定。
　　3.3.5  异常毒性检查
　　依法检查（通则1141），应符合规定。注射剂量为每只小鼠0.5ml，含1次人用剂量的制品；每只豚鼠5ml，含10次人用剂量的制品。
　　3.3.6  热原检查
　　依法检查（通则1142），注射剂量按家兔体重每1kg注射0.05μg多糖，应符合规定。
　　3.3.7  细菌内毒素检查
　　依法检查（通则1143），每1次人用剂量应不高于1250EU。
　　4  稀释剂
　　稀释剂为无菌、无热原PBS。稀释剂的生产应符合批准的要求。
　　4.1  外观
　　应为无色澄明液体。
　　4.2  可见异物检查
　　依法检查（通则0904），应符合规定。
　　4.3  pH值
　　应为6.8～7.2（通则0631）。
　　4.4  无菌检查
　　依法检查（通则1101），应符合规定。
　　4.5  细菌内毒素检查
　　依法检查（通则1143），应不高于0.25EU/ml。
　　5  保存、运输及有效期
　　于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，有效期为24个月。
　　6  使用说明
　　应符合“生物制品分包装及贮运管理”规定和批准的内容。