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基因扩增是什么意思?

       基因扩增是基因序列拷贝数的增加。癌细胞有时会响应来自其他细胞或其环境的信号而产生多个基因拷贝。该术语也可以指聚合酶链反应 (PCR),这是一种实验室技术,科学家使用该技术在试管中扩增基因序列。

       基因扩增是那些对不同人意味着不同事物的条款之一,这取决于他们如何看待它。在最简单的层面上,它意味着基因序列拷贝数的增加。现在,癌细胞有时会制造多个基因拷贝,以响应来自其他细胞的错误信号或因为它们从环境中获得的信号。所以从这个意义上说,我们认为它是一个非常消极的术语;它预示着一些本不应该发生在身体上的事情显然正在发生。但这也只是一个非常科学的术语,没有正面或负面的含义。因为它指的是一种称为聚合酶链反应或 PCR 的实验室技术,并且' 一项技术,科学家可以在试管内漂浮的 30 亿个其他碱基的背景下,在试管中扩增单个基因。这种技术、PCR 或聚合酶链反应,确实是当今正在开展的大量分子生物学研究的支柱。事实上,发现它的人最终因此获得了诺贝尔奖。因此,当您听到“基因扩增”这个词时,请先考虑上下文,然后再考虑具体情况。发现它的人最终因此获得了诺贝尔奖。因此,当您听到“基因扩增”这个词时,请先考虑上下文,然后再考虑具体情况。发现它的人最终因此获得了诺贝尔奖。因此,当您听到“基因扩增”这个词时,请先考虑上下文,然后再考虑具体情况。

        Elaine A. Ostrander,博士

PCR基因扩增原理及方法步骤

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实验概要

PCR扩增目标DNA片段。

实验原理

多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。

1. 模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;

2. 模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;

3. 引物的延伸:DNA模板-引物结合物在Taq DNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性、退火、延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩增的目的基因扩增放大几百万倍。

典型的PCR反应体系由如下组分组成:DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl 2 、两个合成的DNA引物、耐热 Taq聚合酶。

除了典型的PCR外,人们还根据各种用途设计了各种不同的PCR。如:

RT-PCR,即在mRNA反转录之后进行的PCR。

反向PCR,常规PCR允许扩增两引物之间的DNA区段,而反向PCR则可以对靶DNA区段之外的两侧未知的DNA序列进行扩增。

不对称PCR,常规PCR使用的引物浓度相同,而不对称PCR使用的引物浓度不同,两种引物浓度相差100倍。在最初20各循环中,主要产物是双链DNA。当低浓度引物被耗尽后,高浓度引物引导的PCR就会产生大量单链DNA,单链DNA可用于序列测定。

主要试剂

1. DNA模板(1ng/μL)(质粒R-pGEX-4T-1,R指代外源基因)

2. 2.5mmol/LdNTP (TaKaRa)

3. 10×PCR缓冲液(TaKaRa)

4. 25mmol/L MgCl 2 (TaKaRa)

5. 引物1、引物2(5pmol/μL)

引物序列如下:

引物1:5’-CGGAATTCATGGACGGTCAGA-3’

引物2:5’-GCGTCGACTCATTCAGATTTGCG-3’

6. Taq DNA聚合酶(TaKaRa)

7. 琼指糖

8. 溴化乙锭(1%EB,终浓度0.5μg/mL)

9. DNA marker 2000(TaKaRa)

基因扩增是基因序列拷贝数的增加。癌细胞有时会响应来自其他细胞或其环境的信号而产生多个基因拷贝。该术语也可以指聚合酶链反应 (PCR),这是一种实验室技术,科学家使用该技术在试管中扩增基因序列。

基因扩增是那些对不同人意味着不同事物的条款之一,这取决于他们如何看待它。在最简单的层面上,它意味着基因序列拷贝数的增加。现在,癌细胞有时会制造多个基因拷贝,以响应来自其他细胞的错误信号或因为它们从环境中获得的信号。所以从这个意义上说,我们认为它是一个非常消极的术语;它预示着一些本不应该发生在身体上的事情显然正在发生。但这也只是一个非常科学的术语,没有正面或负面的含义。因为它指的是一种称为聚合酶链反应或 PCR 的实验室技术,并且’ 一项技术,科学家可以在试管内漂浮的 30 亿个其他碱基的背景下,在试管中扩增单个基因。这种技术、PCR 或聚合酶链反应,确实是当今正在开展的大量分子生物学研究的支柱。事实上,发现它的人最终因此获得了诺贝尔奖。因此,当您听到“基因扩增”这个词时,请先考虑上下文,然后再考虑具体情况。发现它的人最终因此获得了诺贝尔奖。因此,当您听到“基因扩增”这个词时,请先考虑上下文,然后再考虑具体情&