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外植体灭菌 — 植物组织培养方案

外植体灭菌 — 植物组织培养方案

常用的植物组织培养消毒剂

消毒剂 产品编号 浓度(%) 暴露时间(min)
次氯酸钙 211389 9-10 5-30
次氯酸钠* 425044 0.5-5 5-30
过氧化氢 H1009 3-12 5-15
乙醇 E7148 70-95 0.1-5.0
硝酸银 S7276 1 5-30
氯化汞 M1136 0.1-1.0 2-10
苯扎氯铵 B1383 0.01-0.1 5-20

*商业漂白剂含有约5%的次氯酸钠,因此可以以10-20%的浓度使用,其相当于0.5-1.0%的次氯酸钠。

灭菌程序可以通过以下方式加强:

  1. 在用另一种消毒剂溶液处理之前,将材料置于70%乙醇溶液中。已证明使用两步(双源)灭菌程序对某些物种有益。

  2. 可以在消毒剂中加入润湿剂,如TWEEN®20或80(产品编号分别是P1379、P1754),以降低表面张力,使表面更好接触。

  3. 在真空下进行灭菌过程。这样可以去除气泡,并提供更有效的灭菌过程。

兰花种子灭菌

兰花种子非常小,几乎没有营养储备。单个果荚可含有1,500至3,000,000个种子。体外播种可使萌发未成熟的种子(绿荚)成为可能。在果荚裂开后,对绿色果荚灭菌比对单个种子灭菌更容易。 Lucke(1971)指出,当果荚达到约三分之二成熟度时,可以对兰花种子灭菌。下面列出了各种兰花品种果荚的估计正常成熟时间。

兰花属 成熟时间(月)
石豆兰属 3
虾脊兰属 4
卡特兰属 11
贝母兰属 13