食品中番泻苷A、番泻苷B和大黄素甲醚的测定BJS 201917

食品中番泻苷A、番泻苷B和大黄素甲醚的测定BJS 201917

食品中番泻苷A、番泻苷B和大黄素甲醚的测定BJS 201917 1范围本方法规定了食品（含保健食品）中番泻苷A、番泻苷B和大黄素甲醚含量的高效液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于饮料、代用茶等食品及片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等剂型的保健食品中番泻苷A、番泻苷B和大黄素甲醚含量的测定。2原理试样经甲醇-甲酸铵溶液（9:1）超声提取、离心、过滤后，滤液供高效液相色谱-质谱联用仪测定，外标法定量。3试剂和材料注：水为GB/T 6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1 甲酸（HCOOH）：色谱纯。3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.3 甲酸铵（CH5NO2）：色谱纯。3.2 试剂配制3.2.1 甲酸溶液（0.1%）：取甲酸（3.1.1）1.0mL用水稀释至1000mL。3.2.2 甲酸铵溶液(2mmoL/L)：称取甲酸铵（3.1.3）0.13g（精确至0.01g），溶于水并稀释至1L。3.2.3 甲醇-甲酸铵溶液（9:1）：取甲醇（3.1.2）900mL，加入100mL甲酸铵溶液（3.2.2），混匀。2 3.3 标准物质番泻苷A、番泻苷B和大黄素甲醚的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1。番泻苷B和番泻苷A的纯度均≥95.0%，大黄素甲醚纯度≥99.0%。3.4 标准溶液配制3.4.1 番泻苷A标准储备液（40μg/mL）：准确称取番泻苷A（3.3）10.0mg(精确至0.0001g)，置250mL量瓶中，加入甲醇-甲酸铵溶液（9:1）（3.2.3）200mL，超声（40°C）使溶解，冷却至室温，用甲醇-甲酸铵溶液定容至刻度，摇匀，制成浓度为40μg/mL标准储备液，-20°C保存，保存期3个月。3.4.2 番泻苷B标准储备液（40μg/mL）：准确称取番泻苷B（3.3）10.0mg(精确至0.0001g)，置250mL量瓶中，加入甲醇-甲酸铵溶液（9:1）（3.2.3）200mL，使其溶解，用甲醇-甲酸铵溶液定容至刻度，摇匀，制成浓度为40μg/mL标准储备液，-20°C保存，保存期3个月。3.4.3 大黄素甲醚标准储备液（40μg/mL）：准确称取大黄素甲醚（3.3）10.0mg(精确至0.0001g)，置250mL量瓶中，加入甲醇（3.1.2）200mL，超声（40°C）使溶解，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成浓度为40μg/mL标准储备液，-20°C保存，保存期3个月。3.4.4混合标准中间液（10μg/mL）：分别准确吸取番泻苷A、番泻苷B和大黄素甲醚标准储备液(40μg/mL)各 2.5mL，用甲醇-甲酸铵溶液（9:1）（3.2.3）稀释至10mL，摇匀，制成10μg/mL的混合标准中间液，-20°C保存，保存期1个月。3.4.5混合标准系列工作液的制备：分别准确吸取混合标准中间液（10μg/mL）（3.4.4）适量，用甲醇-甲酸铵溶液（9:1）（3.2.3）稀释，摇匀，作为系列混合标准工作溶液，浓度依次为各化合物0.25μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、 2.0μg/mL、4.0μg/mL、8.0μg/mL，临用新制或依仪器响应情况配制适当浓度的混合标准工作溶液。或根据需要采用空白基质提取液（5.1.3），配制适当浓度的基质混合标准工作溶液。4   仪器和设备4.1 高效液相色谱-质谱联用仪，配有电喷雾（ESI）离子源。4.2 天平：感量分别为0.00001g和0.0001g。4.3 超声波清洗器。4.4 涡旋混匀器。4.5 离心机：转速≥3000r/min。5   分析步骤5.1 试样制备5.1.1 固态试样或半固态试样取适量固态试样（代用茶及片剂、胶囊内容物、颗粒剂等保健食品）混匀，研细，或取适量半固态试样（软胶囊）内容物混匀，准确称取1.0g（精确至0.001g），置100mL量瓶中，加入甲醇-甲酸铵溶液（9:1）（3.2.3）80mL，涡旋混匀1 min，超声（40°C）提取60min，冷却至室温，用甲醇-甲酸铵溶液（9:1）定容至刻度，摇匀，以3000r/min离心5min，取适量上清液过0.22 μm有机滤膜，取续滤液，待测。5.1.2 液态试样取适量试样（饮料、口服液）混匀，准确量取1.0mL，置100mL量瓶中，加入甲醇-甲酸铵溶液（9:1）（3.2.3）80mL，涡旋混匀1min，超声（40°C）提取60min，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，以3000r/min离心5min，取适量上清液过0.22μm有机滤膜，取续滤液，待测。5.1.3 空白基质提取液称取空白试样适量，与试样同法处理，制得空白基质提取液。5.1.4 空白溶液不加试样，与试样同法处理，制得空白溶液。4 5.2 仪器参考条件5.2.1 色谱参考条件a）色谱柱：C18（2.1×50mm，1.8μm），或性能相当者。b）流动相：A相为甲醇（3.1.2），B相为0.1%甲酸溶液（3.2.1），梯度洗脱程序见表1。c）流速：0.2mL/min。d）柱温：40°C。e）进样量：2μL。