质粒DNA纯化
质粒DNA纯化
质粒纯化简介
DNA、RNA和蛋白等大分子的提取常用于分子生物学研究。核酸提取和纯化已经不再是一个复杂、密集劳动力的过程。现在的核酸纯化技术可提供较高的样品输出量、纯度和生物分子可扩展性，并具有最小的交叉污染。也常使用转为中高通量实验室所设计的自动化系统。
制备用于质粒纯化的核酸
核酸制备一开始需要收集样本（细菌，动物组织和细胞，或植物组织）。无论使用哪一种DNA制备方法，都需要以恰当的方式收集和处理样本，才能得到高质量核酸。如工作流程所示（图1），从样本收集到核酸纯化可能包含样本收集，运输，存档，储存，核酸纯化这一系列过程。
图 1.包含样本收集、运输、存档和DNA纯化的工作流程。
核酸提取
DNA提取包含了 细胞膜裂解，去除组蛋白，RNA和脂质和纯化。各种不同的提取和纯化方法见表1。
方法 特点
传统方法
碱性提取法
(PLED35)
高分子染色体DNA碱性变性
用于提取质粒DNA
离心后回收处理
氯化铯（CsCl）密度梯度离心
预备DNA密度梯度超离心
用于提取质粒DNA
纯化核酸需要用酒精再沉淀
Oligp(dT)-纤维素层析
RNA纯化
从哺乳动物细胞大量提取RNA
硫氰酸胍-苯酚-氯仿提纯（30911）
一步液液提取法，用于培养细胞和大多数动物组织中提取RNA
四小时高产量
后续步骤异丙醇沉淀
固相核酸提取
二氧化硅基质*
用于选择性DNA结合和DNA纯化
使用Tris-EDTA缓冲液或蒸馏水在低离子强度(pH ≥7)下洗脱纯化DNA分子
玻璃粒子
在高离液盐溶液条件下，用于从其他物质中分离出核酸
硅藻土（硅藻土或硅藻土）
可用于质粒和其他DNA纯化；在高离液盐溶液条件下，将DNA固定在颗粒上
低盐缓冲液或蒸馏水DNA洗脱
阳离子交换物质
树脂表面正电二乙氨基乙基纤维素（DEAE）基团和负电DNA骨架磷酸盐交换
* GenElute产品
表1.核酸提取方法综述
质粒DNA
质粒是一种小型的环状双链DNA，在分子生物学可用于遗传信息的操作和解码。因为操作简单，它们已经成为了克隆和生物技术中的重要组成部分。
质粒DNA纯化有多种方法。我们致力于为您带来更加绿色的替代产品，这些产品遵守一项或多项绿色化学12项原则。相比标准DNA提取方法使用苯酚和氯仿，GenElute产品是更安全的化学产品。
GenElute™制备小提试剂盒是一种从大肠杆菌培养物中提取质粒DNA的简单、快速、高效的方法。试剂盒结合了硅基膜技术和方便的离心管，能从每毫升过夜培养液中回收到最多20 mg高拷贝质粒DNA。以下是GenElute™制备小提试剂盒质粒DNA提取和纯化主要步骤（图2）。
离心收获细菌细胞，使用改良碱性SDS法裂解，高盐条件下DNA被二氧化硅吸收。
然后通过简单的清洗步骤去除污染物。
用Tris-EDTA缓冲液洗脱DNA。回收到的质粒DNA主要是超螺旋形式。
DNA可用于限制性内切酶消化，克隆，PCR，转化，转录，传统和自动化测序。
部分质粒DNA纯化试剂盒见表2。不同质粒DNA纯化方法详细说明（PDF）。.
图 2.从质粒制备和提取核酸工作流程。PCR DNA纯化：货号NA1020和PCR9604
产品编号 产品名称 特点
PLN10
PLN70
PLN350 GenElute™质粒小量制备试剂盒
每毫升培养液最多纯化提取20 μg质粒DNA
30分钟内最多纯化24个质粒DNA样本
比重力流阴离子交换柱快
无可检测到的DNA或RNA污染
不需要苯酚/氯仿提取或酒精沉淀
包含额外的洗涤缓冲液，可用于enda+ 大肠杆菌菌株（如hb101 jm101、 bl21）
NA0150S
NA0150
NA0160
NA0200S
NA0200
NA0300S
NA0300
NA0310
GenElute™ HP质粒小提试剂盒
从获得的细菌培养中得到纯化质粒DNA只需要30分钟或更少时间
高拷贝质粒DNA产率最多25 μg (mini)，350 μg (midi)和1.2 mg (maxi)
应用灵活，提供真空或离心法
不需要苯酚/氯仿提取或酒精沉淀
试剂盒室温稳定，储存方便
性价比高
PLED35 GenElute™无内毒素质粒小提试剂盒
纯化最多250 mg无内毒素质粒DNA(≤0.1 eu/μg DNA)
快速方便，2小时内最多可制备12个样品
比重力流离子交换柱或磁珠制备法省时
不需要昂贵的磁力设备
NA0500 GenElute™ HP质粒中提试剂盒
精密——最新技术提高效果
产量高——90分钟或更短时间内得到5 mg高质量、无内毒素(≤0.1 eu/μg)质粒DNA
方便——真空法不需要乙醇沉淀
NA0400S
NA0400
NA0410 GenElute™ HP无内毒素质粒大提试剂盒
快速——从获得的细菌培养中得到纯化质粒DNA只需要40分钟
灵活——方便的真空法不需要使用重力流柱
高产量——最多1.2 mg高拷贝质粒DNA（≤0.1 eu/μg）
NA0600 GenElute™ HP无内毒素质粒中提试剂盒
快速——从获得的细菌培养中得到纯化质粒DNA只需要90分钟
方便——真空法不需要乙醇沉淀
高产量——最多5 mg高拷贝质粒DNA（≤0.1 eu/μg）
NA0800 GenElute™ HP选择质粒超大抽提试剂盒
精密——使用HP选择技术，最好的质粒纯化方法
产量高——2小时或更短时间内得到15 mg高质量、无内毒素(≤0.1 eu/μg)质粒DNA
方便——真空法不需要乙醇沉淀
多功能——可以用来纯化低，中和高拷贝质粒DNA
NA0100 PhasePrep™ BAC DNA提取试剂盒
一般情况下5-500 mL过夜培养液DNA产量为2-100 μg
不需要苯酚/氯仿提取
该试剂盒适用小提或大提
表2.质粒DNA纯化试剂盒
产品编号 产品名称
NA1020 GenElute™ PCR纯化试剂盒
PCR9604 GenElute™ 96孔PCR纯化试剂盒
表3.PCR纯化产品
参考文献
1.
Tan SC, Yiap BC. 2009. DNA, RNA, and Protein Extraction: The Past and The Present. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 20091-10. http://dx.doi.org/10.1155/2009/574398
2.
Buckingham L, Flaws ML. 2007. Flaws, Molecular Diagnostics: Fundamentals, Methods, & Clinical Applications. Philadelphia, USA: F.A.Davis Company.
3.
Weaver R. 2002. 分子生物学. 2nd edition. San Francisco: McGraw Hill.