高效液相色谱HPLC谱图上拖尾峰是如何形成的？
色谱峰拖尾是最常见的色谱峰形失真，我们想解决如何解决这些失真问题，但首先，让我们了解导致峰拖尾的原因。 当峰不对称因子 (As) 大于 1.2 时会出现峰拖尾——尽管 As 大于 1.5 的峰对于许多测定是可以接受的。这是使用以下等式确定的：作为 = B / A; 其中 B = 峰中心后 10% 峰高处的峰宽；A = 峰中心前基线处的峰宽，峰拖尾的主要原因是出现了不止一种分析物保留机制。在反相分离中，分析物保留通常是通过与固定相的非特异性疏水相互作用来实现的。然而，与驻留在二氧化硅载体表面上的任何电离残留硅烷醇基团的极性相互作用也很常见。具有胺和其他碱性官能团的化合物与此类离子化的硅烷醇基团强烈相互作用，产生拖尾峰。下图显示了流动相 pH > 3.0 时的情况。当然，这可能会导致保留时间缩短，因为样品中存在可电离的碱性分析物 – 然后可能需要通过减少流动相中有机改性剂的含量来缓解这种情况。不应在 pH 3 下使用标准硅胶，因为这可能会导致硅胶溶解。Agilent ZORBAX Stable Bond (SB) 色谱柱设计用于在低 pH (<3) 下运行。下面色谱图中碱性药物化合物的五种组分混合物分别由苯丙醇胺、麻黄碱、苯丙胺、甲基苯丙胺和苯丁胺（峰 1-5）组成。第一张色谱图是在流动相 pH 值为 7.0 时获得的。在这些分离条件下，峰 4 甲基苯丙胺的 As 为 2.35。降低流动相 pH 值可减少碱性分析物与残留硅烷醇基团的相互作用，从而消除过度的峰拖尾。第二个色谱图是在流动相 pH 值为 3.0 时获得的，在这些分离条件下将甲基苯丙胺的 As 降低到 1.33。使用高度去活的色谱柱或者，可以使用“封端柱”。封端是一个过程，其中残留的硅烷醇基团被处理以将它们转化为极性低得多的表面官能团。这具有减少它们可能与极性分析物分子发生的次级相互作用量的效果。 封端过程中通常使用的化学试剂包括：三甲基氯硅烷 (TMCS)六甲基二硅氮烷 (HMDS)封端通过有效阻断极性分析物与潜在可电离残留硅烷醇基团的相互作用，减少了极性分析物的峰拖尾。然而，封端仅使未反应的残余硅烷醇基团的数量进一步减少约 50%。由于空间位阻因素，这种反应的绝对值很少非常有效，因此“完全封端”的色谱柱并不像看起来的那样！Agilent ZORBAX Eclipse Plus 色谱柱采用高度封端、去活，是方法开发或一般实验室使用的绝佳选择。即使是酸性、碱性和高极性分析物，它们也能产生对称的峰形考虑质量过载的可能性 如果所有色谱峰都拖尾，则考虑色谱柱质量过载的可能性。通过简单地稀释样品 x10 并重新评估所得色谱图中的峰形来评估这一点。如有必要，使用更高容量的固定相（即增加碳百分比或孔径），使用直径更大的色谱柱，或减少绝对样品量或进样体积考虑柱床的可能性变形用ñ评估色谱柱以确定色谱柱空隙的形成或入口筛板部分堵塞是否是根本原因。更换色谱柱将很快确认问题。如果怀疑有空隙，请反转色谱柱，将其与检测器断开，并在 100% 强溶剂（至少 10 倍柱体积）中洗涤。这将清除色谱柱入口过滤器中的任何阻塞污染物，直接进入废液。检查制造商的说明以了解色谱柱是否应保持反向流动方向。通过定期更换溶剂过滤器、使用在线过滤器和保护柱，可以避免色谱柱滤芯的堵塞。可以使用以下链接找到有关这些部件的更多信息。溶剂和在线过滤器保护柱分析碱性化合物时在高 pH 值下工作从实用的角度来看，通常只能使用 pH 值来抑制酸离子化，因为碱离子化通常需要大于 8 的 pH 值，在该 pH 值下二氧化硅会发生溶解。然而，安捷伦 ZORBAX Extend HPLC 色谱柱能够在更宽的 pH 值条件下运行，通过使用双齿和三齿配体防止硅胶表面溶解。这些配体是双齿的，并在它们应用于固定相之前使用专有化学进行桥接。它们的桥接结构提供了防止二氧化硅表面水解的空间保护。Agilent ZORBAX Extend HPLC 色谱柱的双齿配体干扰化合物的可能出现是不应忽略峰拖尾的主要原因。通过改变检测波长来确认干扰物的存在，或通过使用效率更高的色谱柱（即更长的色谱柱或填充更小的颗粒的色谱柱）来提高分离的分辨率。安捷伦 ZORBAX RRHT 和 RRHD 色谱柱旨在提供非常高效的分离，可用于分离共流出峰。使用样品净化程序固相萃取 (SPE) 可用于去除任何干扰污染物。 而且...不再有峰拖尾使用这些方法中的一种或所有方法，可以结束由可怕的峰拖尾带来的色谱问题。与我们色谱范式中的许多事情一样，答案比看起来更接近。